生物實(shí)驗(yàn)室常識
2021-02-10 10:58:03
保存在冰箱中的酚，容易被空氣氧化而變成粉紅色，這樣的酚容易降解DNA，一般不可以使用。為了防止酚的氧化，可加入0.1%的8-羥基喹啉及少量巰基乙醇。8-羥基喹啉是帶有淡黃色的固體粉沫，不僅能抗氧化，并在一定程度上能抑制DNase的活性。
2.如何將不同構(gòu)型的質(zhì)粒DNA區(qū)別開？
由于不同構(gòu)型的DNA在瓊脂糖凝膠電泳中的遷移率不同，ccc DNA的泳動速度最快，通過凝膠電泳方法可將不同構(gòu)型的DNA區(qū)別開。
3.用酚-氯仿抽提細(xì)胞基因組DNA時，通常要在酚-氯仿中加少許異戊醇，為什么？
異戊醇可以降低表面張力，從而減少氣泡產(chǎn)生。另外，異戊醇有助于分相，使離心后的上層含DNA的水相、中間的變性蛋白相及下層有機(jī)溶劑相維持穩(wěn)定。
4.用乙醇沉淀DNA時，為什么加入單價的陽離子？
用乙醇沉淀DNA時，通常要在溶液中加入單價的陽離子，如NaCl 或 NaAc，Na+中和DNA分子上的負(fù)電荷，減少DNA分子之間的同性電荷相斥力，而易于聚集沉淀。
5.在提取RNA時經(jīng)常使用異硫氰酸胍，有什么作用？
RNA是一種極易降解的核酸分子。高濃度強(qiáng)變性劑異硫氰酸胍使細(xì)胞結(jié)構(gòu)迅速被破壞，使RNA從細(xì)胞中釋放出來。同時高濃度異硫氰酸胍還使細(xì)胞內(nèi)的RNA酶失活，使釋放出的RNA不被降解。
6.蛋白印跡中封閉液的作用？
封閉液的作用是封閉未吸附蛋白的部位，以減少非特異性結(jié)合背景的影響。常用的封閉液有脫脂奶粉、小牛血清等。
7.DNA通常保存在什么緩沖液中？
采用TE緩沖液，Tris-HCl的緩沖系統(tǒng)，加入EDTA可以螯合二價金屬離子進(jìn)而抑制依賴于二價金屬離子的DNA酶的活性，對DNA起到保護(hù)作用。
8.在酶切反應(yīng)緩沖液中為什么加入BSA？
通過提高溶液中蛋白質(zhì)的濃度，對酶起保護(hù)作用。
9.簡單的克隆載體必需包括什么？
復(fù)制起點(diǎn)；選擇標(biāo)記：主要是抗性基因；多克隆位點(diǎn)：便于外源DNA的插入。
10.用酚抽提細(xì)胞DNA時，有什么作用？
使蛋白質(zhì)變性。
11.在分離DNA時，要使用EDTA，為什么？
EDTA是金屬離子螯合劑，螯合二價離子，抑制核酸酶的活性。
12.在分離DNA過程中，造成DNA分子斷裂的因素有哪些？
核酸酶降解；化學(xué)降解；物理剪切。
13.使用離心機(jī)應(yīng)注意什么？
首先應(yīng)該根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的離心機(jī)和轉(zhuǎn)子以及離心管，使用離心機(jī)時的工作轉(zhuǎn)速不應(yīng)該超過離心機(jī)、轉(zhuǎn)子以及離心管的最大允許轉(zhuǎn)速。離心前注意嚴(yán)格平衡樣品。安裝轉(zhuǎn)子和轉(zhuǎn)子蓋要規(guī)范、準(zhǔn)確。離心時要留人看守，發(fā)現(xiàn)離心機(jī)異常應(yīng)立即關(guān)閉離心機(jī)。離心結(jié)束后要安放好轉(zhuǎn)子。
14.分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法有哪些？
高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌、化學(xué)藥劑消毒、過濾除菌
15.使用移液器有哪些注意事項(xiàng)？
垂直吸液、慢吸慢放；選擇合適的量程范圍，不能超過量程使用；選擇與移液器匹配的槍頭，安裝槍頭時不要用力太猛；移液器每日用完后，應(yīng)旋到最大刻度。